흡착제로 보충된 육계의 면역 매개변수 및 마이코톡신으로 도전적인 정량화

수의학 및 동물 과학 2022년; 10(4): 78-82 http://www.sciencepublishinggroup.com/j/avs doi: 10.11648/j.avs.20221004.11 ISSN: 2328-5842(인쇄물); ISSN: 2328-5850(온라인)

1. 소개 전 세계적으로 식품과 사료는 aflatoxin, zearalenone, fumonisin, deoxynivalenol 및 ochratoxin이 가장 흔한 mycotoxin으로 심각하게 오염되어 있다[23].

농장 동물에서 진균독소 섭취는 임상적 진균독성증을 일으키지 않는 수준에서 면역 기능을 억제하고 전염병에 대한 저항성을 감소시킬 수 있습니다[1]. 식균 작용 및 인터루킨 분석을 포함하여 동물의 면역 상태를 평가하기 위한 몇 가지 관련 매개 변수가 있습니다. Sattler et al. [24], 식균 작용은 병원균에 대한 면역 체계의 첫 번째 방어선의 중심 과정이 되었습니다. 전문 식세포는 미생물을 흡수하고 죽이고 소화하며 후속 면역 반응을 활성화합니다. 본질적으로 사이토카인은 유기체의 우세한 상태에 의해 영향을 받는 다양한 생물학적 효과를 유발할 수 있는 세포 매개체의 통합 네트워크를 나타냅니다[2]. 포유류와 유사한 조류 사이토카인은 병원성 감염에 대한 숙주의 면역 반응에 영향을 미칩니다. 일반적으로 전 염증 또는 항 염증으로 분류되는 사이토 카인은 자극 후 다양한 세포 집단에 의해 분비됩니다 [21]. 특히, 전염증성 및 항염증성 유형 모두 감염의 여러 단계에서 면역원에 대해 뚜렷한 반응을 이끌어냅니다[3]. IL-6는 염증 반응의 초기 민감 지표로 간주됩니다. 간에서 급성기 단백질 합성의 기본 자극제입니다. 염증 상태에서 환자의 혈청 내 IL-6 농도는 여러 번 증가합니다[5]. 인터루킨 IL10은 주요 항염증성 사이토카인 중 하나입니다. 자연 살해 세포와 주로 T 림프구의 뚜렷한 기능을 억제하여 APC에 의한 IL-12 및 기타 전염증성 사이토카인(예: TNFα, IL-6 및 IL-1β)의 생성을 방지합니다[20, 27]. IL-10은 일반적으로 TLR(톨 유사 수용체)의 자극에 의해 유도되는 식세포 및 수지상 세포에서 여러 유전자의 발현 증가를 방지합니다[27]. 사료 첨가제로 마이코톡신 해독제의 사용은 오염된 사료 성분에서 마이코톡신의 독성을 감소시켜 동물 사료 제제에 사용할 수 있도록 하는 것을 목표로 합니다[16]. 이에 상응하는 무수히 많은 주장이 있는 광범위한 곰팡이 독소 해독제가 있습니다[12]. 이 연구의 목적은 마이코톡신인 아플라톡신, 푸모니신 및 DON으로 공격받은 육계의 면역학적 매개변수에 대한 다양한 조성을 가진 다양한 마이코톡신 흡착제의 효과를 평가하는 것이었습니다. 5번의 처리와 6번의 반복 실험으로 총 30개의 실험 단위가 있으며 각 우리는 10마리의 새들로 구성된 실험 단위입니다.

실험 식단은 NRC 권장 사항에 따라 영양 요구 사항을 충족하도록 공식화되었습니다[22]. 식이는 표 1에 나타낸 조성에 따라 이소칼로리, 이소프로테익 및 이소비타민이었다. 원료 및 실험 식이는 마이코톡신(아플라톡신, 데옥시니발레놀, 디아세톡시시르페놀, 우모니신, 오크라톡신 A, 독소 T-2 및 제랄레논)의 존재에 대해 분석하였다. , 사용된 원료에서 곰팡이 독소가 검출되지 않았습니다.   제품 kg당 1 보증 수준: 엽산: 140 mg/kg; 판토트산 1700 mg/kg; 비오틴: 15mg/kg; 칼슘: 30/130g/kg; 구리: 1410 mg/kg; 콜린: 40g/kg DL-메티오닌: 260g/kg; 엔라마이신: 1333mg/kg; 철: 8500 mg/kg 요오드: 150 mg/kg; 라이신: 50g/kg; 망간: 12g/kg; 니아신: 5930mg/kg; 셀레늄: 45mg/kg; 비트. A: 1800000 IU/kg, Vit. B1: 580mg/kg; 비트. B12: 3000mcg/kg; 비트. B2: 960mg/kg; 비트. B6: 730mg/kg; 비트. D3: 300000 IU/kg; 비트. E: 3750IU/kg; 비트. K3: 300mg/kg, 아연: 9170mg/kg.

1 번 테이블. 다이어트의 구성.

재료	%
옥수수	63,00
대두박	29,80
콩기름	3,00
라이신	0,10
메티오닌	0,04
인산이칼슘	2,00
방해석 석회암	1,00
소금	0,46
프리믹스1	0,60
계산된 구성
조단백질	20%
대사 가능한 에너지	3050Kcal/kg
만난 + 낭종	0,95%
라이신	1,19%
칼슘	0,95%
사용 가능한 인	0,48%
나트륨	0,22%

2. 재료 및 방법 2.1. 동물 이 프로젝트는 SAMITEC – CEUA/SAMITEC.288.274의 동물 사용 윤리 위원회(CEUA)의 승인을 받았습니다. Cobb's 500 계통의 300마리의 육계 수컷이 사용되었으며, 1일령이고 평균 체중은 41.88g입니다. 실험 테스트는 22m 실험실에서 수행되었습니다.2, 음압으로 순응. 동물들은 폭 0.5m, 길이 0.5m, 높이 0.33m의 실험 우리에 4개의 겹치는 수준으로 배열되어 있으며 각 수준에는 2개의 우리가 있습니다. 각 케이지에는 피더형 급수기, 높이 조절이 가능한 니플형 급수기가 있습니다. 2.2. 실험 설계 및 다이어트 새는 완전 무작위 디자인으로 배포되었습니다. 새는 실험 기간(1~21일) 동안 사료와 물을 자유롭게 섭취했습니다. 1.0 PPM의 아플라톡신 + 50.0 ppm의 푸모니신 + 25.0 ppm의 DON을 사용하여, 진균독으로 오염된 사료에 2.5kg/kg을 첨가한 상이한 조성을 갖는 3개의 진균독 흡착제를 시험하였다.

아플라톡신(B1, B2, G1 및 G2)은 아스페르길루스 기생충, 사용된 농도는 B1: 93.8%, B2: 2.1%, G1: 3.4% 및 G2: 0.7%였다. Fumonisin(B1 및 B2)은 푸사리움 모닐리포르메, 사용된 농도는 B1의 95.8% 및 B2의 4.2%였다. 그리고 마이코톡신 데옥시니발레놀(DON)은 푸사리움 그라미네아룸. 우리는 오염이 없는 대조군 식단, 흡수제가 없는 진균 오염 식단, 오염된 식단 + SIM – FIX HP를 평가했습니다.🇧🇷, 오염된 사료 + 흡착제 A, 오염된 사료 + 흡착제 B. SIM 흡착제 – FIX HP🇧🇷 1.3 및 1.6 베타 글루칸, 폴리센 벤토나이트, 활성탄, 유기 분자, 실리마린 및 유기 셀레늄의 구성으로 나타납니다. 그리고 제조업체가 알려준 대로 각각의 포장에 있는 흡착제 A에는 건조 양조 효모(글루코만난), 규산나트륨 및 규산칼슘, 굴 가루 등의 조성이 포함되어 있습니다. 흡착제 B는 벤토나이트, 규조토, Eubacterium sp, 해초 가루, 비활성화 효모, 건조 치커리 펄프로 구성됩니다.

2.3. 인터루킨 IL 6 및 IL 10 유전자 발현 실험 기간 종료 시, 맹장 편도선을 수집하고 RT-qPCR에 의해 유전자 발현을 정량화하여 전염증성(IL 6) 및 항염증성(IL 10) 인터루킨의 발현을 결정하였다. 유전자 발현의 정량화는 각 표적에 대한 특정 프라이머(프라이머)를 사용하여 RT-qPCR에 의해 수행됩니다. 이러한 유형의 분석에서 표적과 시료의 각 조합은 시료 내 표적 특이적 메신저 RNA(mRNA)의 농도 측정값인 임계값 Ct(임계값 주기)를 생성합니다. Ct 값은 이전에 선택한 참조 유전자의 함수로 정규화되어 deltaCt(dCt) 값(Ct 대상-Ct 참조 유전자)을 생성해야 합니다. RNA 추출을 위해 약 100mg의 조직을 TissueLyser(Qiagen)에서 균질화하고 전체 RNA를 TRI® Reagent(Sigma) – 클로로포름으로 추출하여 정제했습니다. 추출물을 turboDNaseI(Ambion)로 처리하고 RNA를 NanoDrop(Thermo Scientific)으로 정량화했습니다. cDNA는 반응당 1ug의 RNA를 사용하여 High Throughput cDNA Reverse Transcription 키트(Applied Biosystems)를 사용하여 합성되었습니다. cDNA를 멸균 MilliQ 물에 5배 희석하고 QuantStudio 3 열순환기(Thermo)에서 Bright-Green PCR Master Mix(Biotium)를 사용하여 표적을 정량화했습니다. 사용된 주기는 95°C 10분, 이어서 95°C 15초 및 60°C 1분의 40주기였습니다. Primer Express 3.0 프로그램을 사용하여 올리고뉴클레오티드 프라이머를 설계했습니다. GAPDH와 ACTB 유전자를 내부 대조군으로 사용하였고 상대적인 유전자 발현은 2-ΔΔCt 방법을 사용하여 결정하였다[17]. 2.4. 통계 분석 데이터는 5%에서 Tukey의 테스트에 의해 분산 분석 및 평균 비교에 적용되었습니다.   3. 결과 및 토론 인터루킨 IL-6 및 IL-10의 유전자 발현 결과는 그림 1에 나와 있습니다. 생성을 억제하는 역할을 하는 진균독소 + 흡착제 B로 오염된 사료를 섭취한 새에서 IL-6의 낮은 발현이 관찰되었습니다. 프로 분자 - 조직 손상을 제한하고 조직 항상성을 유지 또는 복원하기 위한 염증.

가금류의 면역 체계에 대한 마이코톡신의 효과는 다음과 같이 요약할 수 있습니다: T- 또는 B-림프구 활성 저하(퇴행성 윤활낭 및 흉선), 면역글로불린 및 항체 생성 억제, 보체 또는 인터페론 활성 감소, 대식세포 효과기 세포 기능 손상, 및 항체 역가 및 항생제의 혈청 농도 감소 [11]. 기본적으로 사이토카인은 효과적인 면역 반응의 결과를 중재하고 복잡한 면역 체계의 두 팔(즉, 선천적 및 적응적 요소) 사이의 인터페이스 역할을 합니다[9]. IL-6는 또한 발열 효과가 있습니다. IL-1, TNF 및 INF와 함께 이 사이토카인은 프로스타글란딘 생성을 자극하여 체온을 크게 높일 수 있습니다. IL-6 생산의 증가와 이 사이토카인의 높은 혈청 농도 유지는 급성 염증 반응에서 만성 단계로의 전환을 촉진합니다[5]. 오염 및 흡착제 추가 시나리오를 고려한 IL-10의 가장 높은 발현은 챌린지 그룹에서 관찰되었으며 흡착제 YES – FIX HP로 보충되었습니다. 이 사실은 아마도 구성과 관련이 있으며 활성 성분 간의 시너지 효과에서 비롯된 것입니다. 현장에서 발견되는 주요 곰팡이 독소의 흡착을 담당하는 원료 외에도 이 흡착제는 면역 조절, 항산화 및 항염증 작용을 하는 것으로 알려진 원리를 포함합니다. 1,3 및 1,6 효모 Sacharomyces cerevisiae의 분석된 다른 흡착제와 달리 유기 셀레늄 및 밀크씨슬 추출물(실리마린) IL-10은 염증 반응을 제한하는 것이 주요 기능인 면역 조절 사이토카인입니다[6]. 병원체에 대한 반응으로 숙주의 손상을 방지하고 정상적인 조직의 항상성을 유지한다[13]. De Smedt 등에 따르면. [7] IL-10은 다른 치료제와 달리 항원을 제시하는 세포의 사이토카인 합성을 조절하고 이를 감소시켜 Th1과 Th2 사이의 반응의 균형을 맞추는 면역반응 조절에 필수적인 역할을 한다. 균형이 맞지 않으면 새의 방어 시스템이 면역 억제되었음을 나타낼 수 있습니다. 다른 처리는 통계적으로 서로 다르지 않았다.

병원체에 대한 면역 반응은 미생물 침입에 대한 숙주 방어를 시작하는 역할을 하는 전염증성 사이토카인의 신속한 활성화를 포함합니다. 그러나 과도한 염증은 숙주에게 해로운 전신 대사 및 혈역학 장애를 일으킬 수 있습니다. 결과적으로 면역 체계는 항 염증 조직 손상 메커니즘과 병행하여 진화했습니다. Yes-Fix HP에 존재하는 베타글루칸의 기능은 주로 마이코톡신, 특히 제랄레논의 흡착입니다[30]. 또한 β-글루칸은 주로 대식세포에 작용하여 다양한 박테리아, 바이러스, 진균 및 기생충에 대해 유익한 효과를 발휘하는 면역 체계의 조절제로 알려져 있으며 [19] 전 염증성 사이토카인의 방출을 감소시킬 수 있습니다[ 28 ].

b-글루칸은 동물 세포에 존재하지 않기 때문에 면역 체계에 의해 "이물질"로 간주되고 주로 선천 면역의 구성원을 활성화하는 미생물 관련 분자 패턴(MAMP)으로 작용합니다[26]. 그러나 더 크거나 더 작은 강도의 조절 반응을 유도하는 이러한 분자의 면역 조절 속성은 아마도 정제 정도 및 생산 공정과 관련된 생명 공학과 관련이 있다는 점은 주목할 만합니다.

Zabriskie et al. [31], 베타-글루칸에 의해 매개되는 면역 조절 메커니즘은 이러한 올리고당을 인식하는 장에 위치한 면역 세포와의 상호 작용에 의존합니다. 과도한 염증 반응은 산화 스트레스와 관련이 있습니다[15]. 셀레늄은 염증 경로 조절에 중요한 역할을 하는 전사 인자인 NF-κB의 활성화를 조절합니다[14]. 셀레늄은 NF-κB가 결국 염증 유발 사이토카인의 발현을 감소시키는 염증 관련 유전자를 활성화하는 것을 억제할 수 있습니다[8]. 셀레늄의 항염증 기능은 간의 산화에 의해 유도된 염증 변화를 감소시키는 글루타티온 퍼옥시다제(GPx)와 같은 특정 셀레노단백질의 존재 때문일 수 있습니다[18].

β-글루칸 및 유기 셀레늄 외에도 Yes – Fix HP 구성의 또 다른 특징은 실리마린의 존재입니다. 실리마린은 Silybum marianum(milk thistle) 식물의 씨앗과 열매에서 추출한 천연물이며 그 효과는 다양한 세포 신호 경로에 작용하는 항산화, 항염증 및 면역 조절 메커니즘에 기인합니다[25, 4] . Wang et al. [29] 삼배체에 의해 유발된 급성 간독성에 대한 도전 전에 실리마린 투여로 전 염증성 인터루킨의 발현 감소를 관찰했습니다. Esmaeila 등에 따르면. [10] 실리마린은 억제성 kappa B(IκB) 분해를 억제하여 factor-kappaB 활성화를 억제하고 염증 반응인 산화 스트레스를 억제합니다. 또한 실리마린은 STAT3 및 ERK1/2 신호 전달 경로를 억제하여 발암, 세포 증식, 세포 이동 및 iNOS 유전자 발현을 억제합니다.

[ IL-6 상대 유전자 발현 새로운. P<0.0001 1.5 | 1.0 | 0.5 | 0.0 Adsorbent Fix HP Control mycotoxin 흡착제 A 흡착제 B ]

[ IL-10 상대 유전자 발현 분산 분석, P<0.0001 1.5 | 1.0 |0.5 | 0.0 컨트롤 마이코톡신 흡착제 픽스 HP로 컨트롤 티흡수제 A 흡수제 B ]

그림 1. 마이코톡신과 다양한 흡착제로 공격받은 육계의 맹장 편도에서 IL-6 및 IL-10 인터루킨의 유전자 발현.

4. 결론 SIM 흡착제 보충 – FIX HP🇧🇷 IL-10의 더 큰 발현을 허용했으며, 이는 구성과 관련이 있을 수 있으며 활성 성분 간의 시너지 효과에서 비롯된 것일 수 있습니다. 이 흡착제는 현장에서 발견되는 주요 마이코톡신의 흡착을 담당하는 원료 외에도 동물의 건강 강화에 기여할 수 있는 면역 조절, 항산화 및 항염증 작용의 알려진 원리를 함유하고 있습니다. 참고문헌 1. Aly, E., Madbouly, Y. (2016). 다양한 경로로 적용된 생 ND 백신에 대한 육계의 면역 반응에 대한 진균독소의 효과. 가운데 동쪽 신문 의 적용된 과학, 06 (01), 51-58. 2. Arseniy EY, 안톤 GK(2014). 인터루킨 안에 암 생물학: 그들의 이질적인 스크롤🇧🇷 엘스비어; 런던, 영국: Academic Press; 미국 메사추세츠주 케임브리지 3. Bello RO, Chin VK, Abd Rachman Issadi MF 외. (2018). 질병 발병기전에서 Interleukin-35 및 Interleukin-37의 역할, 관여 및 기능. 국제적인 신문 의 분자 과학. 19 (4). 4. M. 비작(2017). 밀크씨슬(Silybum marianum L. Gaernt.)의 주요 생체 활성 성분인 실리빈 - 화학, 생체이용률 및 대사. 분자, 22, 1-11. 보르제키, P.

5. Borzecka A., Chylinska-Wrzos P., Lis-Sochocka M., Wawryk-Gawda E., Jodlowska-Jedrych. (2019). 다양한 용량의 파툴린에 중독된 알비노 스위스 쥐의 간에서 인터루킨-6 농도 평가. 현재 문제 제약 중간 과학., 32 (1), 34-39. 6. Cho, MJ, Ellebrecht, CT, Payne, AS (2015). 심상성 천포창에서 인터루킨-10의 이중성. 사이토카인, 73 (2), 335-341. 7. De Smedt, T., van Mechelen, M., De Becker, G., Urbain, J., Leo, O. 및 Moser, M. (1997). 인터루킨-10이 수지상 세포 성숙 및 기능에 미치는 영향. 유럽 사람 신문 의 면역학. 27, 1229-1235. 8. 던타스, LH (2012). 그레이브스병 및 안과 질환의 치료에서 셀레늄의 진화하는 역할. 제이 갑상선 입술, 736161. 9. 듀크 AG, & Descoteaux A. (2014). 대식세포 사이토카인: 면역 및 전염병에 관여. 앞쪽. 면역, 5, 491. 10. Esmaeila N., Anarakib BS, Gharagozlooc M., Moayedia B. (2017). 실리마린은 면역 조절제로서 면역 체계에 영향을 미칩니다. 많은 자물쇠를 위한 하나의 열쇠. 국제적인 면역약리학, 50, 194-201.

11. Hofstetter, U. (2007). 가금류의 면역 체계에 대한 다양한 곰팡이 독소의 부정적인 영향. 바이오민 뉴스레터, 5-46. 12. 홀랜드, DM, Kim, SW (2020). Deoxynivalenol의 만성 식이요법 하에서 젖을 뗀 돼지의 건강과 성장에 대한 곰팡이 독소 해독제의 효능. 독소, 12, 311. 13. Iyer, SS, Cheng, G. (2012). 염증 및 자가면역질환에서 인터루킨 10 전사 조절의 역할. 크리티컬 레브 이뮤놀. 32(1), 23-63.칸, 아리조나 14. Khan, IU, Khan, S. …Ran L. (2019). 셀레늄이 풍부한 프로바이오틱스는 열 스트레스 조건에서 육계의 전 염증성 사이토 카인 및 항산화 능력을 조절하여 간 보호를 향상시킵니다. 고급 수의학 및 동물 연구 저널. 6 (3), 355-361. 15. Kim, SH, Oh, DS, Oh, J.Y, Son, TG, Yuk, D.Y, Jung, S. (2016). 실리마린은 산화 스트레스를 완화하고 염증 반응을 줄임으로써 구속 스트레스로 인한 급성 간 손상을 예방합니다. 분자 21,443. 16. Lauwers M, Croubels S, Letor B, Gougoulias C, Devreese M (2019). 육계 닭 및 돼지에서 진균 독소 해독제의 효능 테스트를 위한 도구로서 노출에 대한 바이오마커. 독소, 11, 187. 17. Livak, KJ, Schmittgen, TD(2001). 실시간 정량 PCR 및 2(-Delta C(T))를 이용한 상대 유전자 발현 데이터 분석 방법. 행동 양식, 25 (4), 402-8. 18. Liu Y, Liu Q, Ye G, Khan A, Liu J, Gan F 등 (2015). 쥐의 사염화탄소 유발 간 섬유증에 대한 셀레늄이 풍부한 프로바이오틱스의 보호 효과. J농식품화학; 63, 242. 19. Mantovani MS, Bellini MF, Angeli JP, Oliveira RJ, Silva AF, Ribeiro LR (2008). 건강을 증진시키는 베타-글루칸: 돌연변이 및 암 예방. MutatRes., 658 (3), 154-61. 20. Moore, KW, Waal Malefyt, R.de, Coffman, RL, & O'Garra, A. (2001). 인터루킨-10 및 인터루킨-10 수용체. 면역학의 연례 검토, 19, 683-765.

21. 닝 X., 지안 Z., 왕 W. (2015). 류마티스 관절염 환자에서 낮은 혈청 Interleukin 35 수치. 도호쿠 J. 특급 메드, 237, 77-82. 22. 국가 연구 위원회L. 가금류의 영양소 요구 사항. 9판. 워싱턴 DC: National Academy of Science, 1994. 154 p. 23. Qu D., Huang X., Han J., Man N. (2017). ochratoxin A 오염 사료를 먹인 육계의 ochratoxicosis를 개선하는 혼합 흡착제의 효능. 이탈리아 사람 J Anim Sci. 16, 573-579. 24. Sattler N., Monroy R., Soldati T. (2013) 식균 작용 및 식균 성숙의 정량 분석. In: Eichinger L., Rivero F. (eds) Dictyostelium discoideum 프로토콜. 분자 생물학의 방법(방법 및 프로토콜), 983권. Humana Press, Totowa, NJ. https://doi.org/10.1007/978-1-62703-302-2_21 25. Shahbazi, F., Dashti-Khavidaki, S., Khalili, H., Lessan-Pezeshki, M., (2012). 신독성 약물에 대한 실리마린의 잠재적 신장 보호 효과: 문헌 검토. 약학 및 제약 과학 저널, 15, 112-123. 26. Soltanian, S., Stuyven, E., Cox, E., Sorgeloos, P. 및 Bossier, P. (2009) 척추동물 및 무척추동물의 면역자극제로서의 베타글루칸. 크리티컬 신부님. 미생물, 35, 109-138. 27. Trinchieri, G. (2007). 이펙터 T 세포에 의한 인터루킨-10 생산: Th1 세포는 자가 제어를 나타냅니다. 실험 의학 저널, 204 (2), 239-43. 28. Tzianabos, AO (2000). 치료제로서의 다당류 면역조절제: 구조적 측면 및 생물학적 기능. 진료소. 미생물, 13, 523-533. 29. 왕 L, 황 QH, 리 YX 등. 쥐에서 triptolide 유발 급성 간독성에 대한 silymarin의 보호 효과. 몰메드 대표 2018; 17(1): 789-800. 도이: 10.3892/mmr.2017.7958. 30. Yiannikouris A., Francois J., Poughon L., Dussap CG, Bertin G., Jeminet G., Jouany JP (2004). Saccharomyces cerevisiae 세포벽에서 베타-D-글루칸에 의한 제랄레논의 흡착. J. FoodProt. 67, 1195-1200. 31. Zabriskie, Hannah A., Julia C. Blumkaitis, Jessica M. Moon, Brad S. Currier, Riley Stefan, Kayla Ratliff, Chad M. Kerksick (2020). 효모 베타-글루칸 보충은 온열 러닝머신 운동 후 전신 염증의 지표를 하향 조절합니다. 영양소, 12 (4), 1144.